近年來,我國逐漸發(fā)展起來一種新型的廣受農(nóng)民朋友喜歡的綠色飼料添加劑,便是由益生菌制成的微生態(tài)制劑。比起傳統(tǒng)的飼料喂養(yǎng)更有增進動物健康素質(zhì),提高健康水平及生產(chǎn)性能等特點。
目前,可用于飼料添加劑領(lǐng)域工業(yè)化生產(chǎn)的菌種很多,我國農(nóng)業(yè)部(2008)公布的飼用微生物添加劑有16種。其中芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌是應(yīng)用最多的微生物添加劑菌種。芽孢桿菌由于穩(wěn)定性好、抗逆性強、復(fù)活率高,通過與病原菌競爭營養(yǎng)物質(zhì),抑制病原菌;提高機體的免疫機能,并提供營養(yǎng)物質(zhì)等作用,調(diào)節(jié)消化道健康,增強動物體的免疫功能,達到促進目標(biāo)動物的生長、提高飼料的轉(zhuǎn)化率的目的。本文將簡單介紹芽孢桿菌的生長繁殖及其營養(yǎng)和免疫的特點,以及作用機制的研究進展。
一、芽孢形成、結(jié)構(gòu)和種類
某些細(xì)菌在生長后期能夠形成一種特有的休眠狀態(tài)的細(xì)胞,稱為內(nèi)生孢子,亦稱芽孢。芽孢桿菌的芽孢直徑一般小于菌體直徑,圓形、橢圓形,為好氧細(xì)菌。芽孢的形成是一個極其復(fù)雜的過程,包括形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分等多方面的變化。光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察研究的結(jié)果,表明芽孢的形成在結(jié)構(gòu)上主要經(jīng)歷以下幾個階段:核物質(zhì)融合成軸絲狀(桿狀);在細(xì)胞中央或一端,細(xì)胞膜內(nèi)陷形成隔膜包圍核物質(zhì),產(chǎn)生一個小細(xì)胞;小細(xì)胞被原來的細(xì)胞膜包圍,生成前孢子。前孢子實質(zhì)上是一個被兩層同心膜包圍著的原生質(zhì)體。在光學(xué)顯微鏡下觀察未染色的活細(xì)菌,可以看到前孢子是一個清亮的、與菌體其他部分明顯不同的區(qū)域;前孢子再被多層膜包圍,如皮層、孢子衣等,最后成為成熟的芽孢,由于細(xì)胞壁的潰溶而釋放出來。
芽孢形成過程中在化學(xué)成分方面也發(fā)生很大變化。生芽孢的細(xì)胞大量吸收鈣離子并大量合成營養(yǎng)細(xì)胞中沒有的吡啶二羧酸。在成熟的芽孢中,芽孢原生質(zhì)體含有極高的吡啶二羧酸鈣,在新合成的、具有特殊化學(xué)構(gòu)造的外層(皮層和孢子衣,有時還有芽孢外壁)中也有這種物質(zhì)。芽孢的壁含有一種特殊的肽聚糖,所有芽孢基本上都一樣,但與營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞壁肽聚糖卻不一樣。同時,芽孢中還含有一些特殊的蛋白質(zhì)。
二、芽孢的特性
2.1芽孢桿菌的抗逆性
由于芽孢在結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分上均有別于營養(yǎng)細(xì)胞,所以芽孢也就具有了許多不同于營養(yǎng)細(xì)胞的特性。芽孢最主要的特點就是抗性強,對高溫、紫外線、干燥、電離輻射和很多有毒的化學(xué)物質(zhì)都有很強的抗性。同時,芽孢還有很強的折光性。在顯微鏡下觀察染色的芽孢細(xì)菌涂片時,可以很容易地將芽孢與營養(yǎng)細(xì)胞區(qū)別開,因為營養(yǎng)細(xì)胞染上了顏色,而芽孢因抗染料且折光性強,表現(xiàn)出透明而無色的外觀。研究表明芽孢抗逆性的機制主要由于其含水量低(40%),含有耐熱的小分子酶類、富含大量特殊的吡啶二羧酸鈣和帶有二硫鍵的蛋白質(zhì),以及具有多層次厚而致密的芽孢壁等原因,使得芽孢具有了抗逆性。自由存在的芽孢沒有明顯的代謝作用,只保持潛在的萌發(fā)力,稱為隱藏的生命。一旦環(huán)境條件合適,芽孢便可以萌發(fā)成營養(yǎng)細(xì)胞。
在孢子狀態(tài)下穩(wěn)定性好,能耐氧化;耐擠壓;耐高溫,能長期耐高溫,如(如金)枯草芽孢桿菌一般在95℃下5分鐘89%能保持存活;耐酸堿,在酸性胃環(huán)境中能保持活性,可以耐唾液和膽汁的攻擊,加工成飼料后95%可在動物體內(nèi)的可以萌發(fā)成營養(yǎng)體。
2.2芽孢桿菌的營養(yǎng)和免疫特性
2.2.1產(chǎn)生多種消化酶
芽孢桿菌能產(chǎn)生多種消化酶,這是其提高動物生產(chǎn)性能的一個重要方面。(如金)枯草芽孢桿菌能產(chǎn)生多種消化酶包括蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶,幫助動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì),同時還具有降解飼料中復(fù)雜碳水化合物的酶,如降解果膠、葡聚糖、纖維素等酶,其中很多是動物本身不具有的酶。芽孢桿菌生長繁殖過程中還能夠產(chǎn)生植酸酶,促使動物對植酸磷的利用和對脂肪的消化吸收;產(chǎn)生的氨基氧化酶及分解硫化氫的酶類,可將吲哚類氧化成無毒、無害的物質(zhì),從而降低畜禽舍內(nèi)氨氣、硫化氫的濃度和臭味,減少環(huán)境的污染。芽孢桿菌的芽孢在形成前后產(chǎn)生活性很強的淀粉酶和中性蛋白酶,這兩種酶不是誘導(dǎo)酶而是與芽孢形成有關(guān),其中的淀粉酶能把淀粉水解成糊精,也能把葡萄糖聚合成多糖;中性蛋白酶與多肽類物質(zhì)的出現(xiàn)密切相關(guān),這些多肽類的合成與芽孢形成前后中性蛋白酶的出現(xiàn)同步。兩種酶與芽孢在動物腸道內(nèi)代謝時產(chǎn)生的淀粉酶、中性蛋白酶不是一種酶,所用底物不同產(chǎn)物也不同。
2.2.2 產(chǎn)生多種營養(yǎng)物質(zhì)
芽孢桿菌能夠合成多種維生素如尼克酸、葉酸、煙酸,維生素B1、B2、B6、B12等,促進機體對蛋白質(zhì)的消化、吸收。凝結(jié)芽孢桿菌、芽孢乳桿菌等菌株能產(chǎn)生乳酸,可提高動物對鈣、磷、鐵的利用,促進維生素D的吸收。此外,芽孢桿菌在其生長繁殖過程中能夠產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸,這些酸類能夠降低動物腸道的pH 可有效抑制病原菌的生長,為乳酸菌的生長創(chuàng)造了條件,其中丙酸還能夠參與三羧酸循環(huán),為動物新陳代謝提供能量。
2.2.3 增強動物體的免疫功能
芽孢桿菌能通過產(chǎn)生抗體和提高嗜菌作用等刺激免疫,激發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫,使動物免疫活性增強。Fuller、Inooka指出芽孢桿菌可提高動物抗體水平或提高巨噬細(xì)胞的活性,實驗表明,該菌能顯著提高動物脾臟的T、B淋巴細(xì)胞比例,對動物的細(xì)胞免疫有重要的作用。芽孢桿菌能促進機體免疫特別是局部免疫提高,使分泌型IgA的分泌增加。芽孢桿菌可使動物血清中的中性粒細(xì)胞吞噬率提高17%,能顯著增加血清中總蛋白、球蛋白的含量,也能增加機體內(nèi)蛋白質(zhì)的沉積,顯著增加血清中特異性抗體的水平,增強特異性免疫應(yīng)答能力,當(dāng)機體遇到病原攻擊時,可以產(chǎn)生高水平的抗體以消滅侵入的病原菌。
三、芽孢桿菌的營養(yǎng)和免疫特性作用機制
3.1拮抗作用
正常微生物通過占位性保護作用,即競爭粘附位點來阻止病原菌附著。芽孢桿菌進入動物胃腸道后,通過生物奪氧作用在生長繁殖過程中消耗腸內(nèi)過量的氣體,造成厭氧狀態(tài),而抑制需氧的有害菌的生長繁殖。并且,芽孢桿菌在生長繁殖過程中可產(chǎn)生細(xì)菌素、有機酸等物質(zhì),改變腸內(nèi)微生態(tài)環(huán)境,形成了不利于有害菌生長繁殖的腸內(nèi)環(huán)境。
3.2增強機體的免疫功能,防御感染
研究表明,芽孢桿菌能促進腸道相關(guān)淋巴組織,使之處于高度反應(yīng)的“準(zhǔn)備狀態(tài)”,同時使免疫器官的發(fā)育增快,免疫系統(tǒng)成熟快而早,T、B淋巴細(xì)胞的數(shù)量增多,使動物的體液和細(xì)胞免疫水平提高,增強機體抗病能力。
3.3產(chǎn)生有益代謝產(chǎn)物
3.3.1產(chǎn)生有機酸:
芽孢桿菌進入動物腸道能夠產(chǎn)生乙酸、丙酸和丁酸等揮發(fā)性脂肪酸,降低腸道PH值,抑制致病菌的生長,激活酸性蛋白酶活性,對新生畜禽是有益的。
3.3.2合成酶類:
芽孢桿菌具有很強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性,可降解飼料中的某些抗?fàn)I養(yǎng)因子,提高飼料轉(zhuǎn)化率可達8%以上。在腸道內(nèi)生長繁殖,能產(chǎn)生各種營養(yǎng)物質(zhì)如維生素、氨基酸、未知促生長因子等,參與機體的新陳代謝,促進動物生長。
3.3.3產(chǎn)生抗菌物質(zhì):
芽孢桿菌在動物腸道內(nèi)產(chǎn)生大量細(xì)菌素、包括桿菌肽、多粘菌素、線性環(huán)多肽復(fù)合物等,可有效地抑制和殺滅進入體內(nèi)的大腸桿菌和沙門氏菌等致病菌。
3.4防止產(chǎn)生有害物質(zhì)
芽孢桿菌在腸道內(nèi)可產(chǎn)生氨基氧化酶及分解硫化物的酶類,可降低血液及糞便中氨、吲哚等有害氣體濃度,形成對動物機體更有利的平衡狀態(tài);同時,動物排泄物、分泌物中的有益微生物數(shù)量也增多,病原微生物減少,從而凈化了體內(nèi)外環(huán)境,減少疾病的發(fā)生。
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